液體樣本甘油檢測試劑盒這么操作更準確

上海信帆生物供應甘油檢測試劑盒，可以檢測的樣本包括血液、細胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧 化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍：測定血液、細胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

組成 ：

R1 試劑 40 ml R2 試劑 10 ml

4 mmol/L 甘油標準品 1 ml

4 oC，儲存 6個月。

所需設備：酶標儀、生化分析儀或 721、722 型可見光分光光度計。最佳工作波長 550nm，如 無此波長建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。

操作步驟：

一. 樣本處理： 酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進行測定，如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后 再測定。

培養(yǎng)液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細胞培養(yǎng)基，如有細胞碎片應 4oC,，12,000g 離心 5min,

取上清進行測定。

血液：新鮮抗凝血，4oC，2,000g 離心 5min 得到血漿；非抗凝血，先 4oC 靜置 2h 得到血清后， 2000g 離心 10min,除去血細胞。將得到的血漿/血清 70oC 加熱 10 分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶，12,000g 離心 10min ,取上清測定或-20oC 保存。

二 .工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與 1 ml 試劑 R2 混合，立即使用或 4oC 保存

<1 天，變色棄去。

三 .標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將 4 mM 甘油標準品倍比稀 釋為 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中 4~6 管即可， 注意設置 0 濃度對照反應管。

四. 甘油濃度測定：

1.參見下表進行加樣。為使反應時間盡量一致，減小實驗誤差，可先加入標準品、待測樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當甘油濃度較低時，可將待測樣品與工作溶液按照   100µl:100µl體積混合，然后再進行測定，但是如果樣品體積超過  100µl    時將會稀釋工作液中酶的濃度，使 反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍，可進行適當稀釋，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計算樣品中甘油濃度。）

2.37oC 或 25oC 反應 15 分鐘。反應平衡后顏色在 60 分鐘內(nèi)穩(wěn)定。 3.先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測定各管 OD 值。

4.繪制標準曲線并計算甘油濃度。

附 Excel 作圖步驟：各標準管 OD 值為 y 軸，標準品濃度為 x 軸。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊

做圖向?qū)Вx擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊

-選項-，點擊-顯示公式-和-R2    值

液體樣本甘油檢測試劑盒這么操作更準確